LyoDt® مسحوق مجفف بالتجميد - عامل الكشف في الوقت الحقيقي لـ PCR لـ Vibrio cholerae O1 - لا يلزم سلسلة البرد ويتم إعطاء اختبار واحد مسبقًا

LyoDt^®PCR في الوقت الحقيقي المجفف بالتجميد عامل الكشف فيبريو كوليراO1

الاستخدام‬‬اليدوي

1.الوصف

فيبريو كوليراهي بكتيريا سلبية غرام تسبب الكوليرا، وهي مرض معدي حاد في الأمعاء يتميز بالظهور السريع، والانتقال العالي، والوفيات الكبيرة.كمرض قابل للحجر الصحي بموجب اللوائح الصحية الدوليةويشمل بشكل أساسي المجموعات O1 و O139. 

هذا المنتج هو مادة تجميد مجففة في الوقت الحقيقيبالنسبة الكشف عنفيبريو كوليراO1. انها تستخدم الحفاظ على عالية rfb جين منفيبريو كوليراO1 كهدف الكشف. إنه خليط رئيسي يحتوي على جميع المكونات اللازمة ، باستثناء الحمض النووي النموذجي ، ويتم توزيعه مسبقًا كاختبار واحد في أنابيب PCR لسهولة الاستخدام.هذا المنتج لا يتطلب سلسلة البرد للنقل والتخزين، مما يقلل بشكل كبير من تكاليف الشحن ، ويقضي على الخسائر المحتملة بسبب هدر المفاعل وتلوث الهباء الجوي.

2المواصفات والتكوين

3. التخزين ومدة صلاحية

التخزينعند درجة حرارة الغرفة (5-30°C). إنه مستقر لمدة تصل إلى 12 شهراً. بمجرد فتح العبوة الفراغية، يرجى تخزين المنتجات غير المستخدمة في الكيس البلاستيكي القابل لإعادة الختم المزود مع المجففات.وفي كيس من ورق الألومنيوم 

تحذير: 

إن تقليص حبة المفاعل يشير إلى أن الرطوبة تتسرب إلى الأنابيب ويتم رطوبة المفاعل.يجب التخلص من أي مادة تجريبية ذات حجم حبة أصغر بكثير من المعتاد أو اختبارها بمراقبة إيجابية قبل الاستخدام لاختبار العينات.

4المعدات الإضافية والمستجيبات المطلوبة

1)أداة PCR في الوقت الحقيقي

2)بيبتيتسو النصائح

3)النواة-المياه المجانية

4)مجموعة استخراج الأحماض النووية

5أنظمة PCR متوافقة في الوقت الحقيقي

ABI 7500/Fast ، Roche LightCycler 480II ، BioRad CFX96 ، Bioer LineGene 9600.

6عينات مقبولة

حساء تخصيب الغذاء، الخ

7. إجراء العملية

1)النوويأسيدEإزالة

مقتطفالحمض النوويمن العينات باستخدام مجموعة استخراج مناسبة.يوصى بأنالحمض النووييتم إزالة مع حوالي 100μl من عازل الإزالة(الـ TE أوH خالية من النواة₂أوه)في الخطوة الأخيرة مناستخراج.يجب استخدام حمض النوكليين النقي على الفور أو تخزينه عند -20 درجة مئوية.

2)إعداد التحكم الإيجابي

يمكن تخزين التحكم الإيجابي في درجة حرارة الغرفة قبل إعادة التجفيف لمدة تصل إلى 12 شهراً.هويجب إعادة ترطيبها قبل الاستخدامبإضافة250μlمن عازل TE أو nخالية من الكليازهـ₂أوه،يتم تشغيلها بسرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية، ويتم طردها عن المركز بسرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية.عند -20°C.

3)الـ PCR في الوقت الحقيقيمالتاسع(ب)التعويض

أ) افتح حزمة الفراغ واخرج شريط 8 أنابيبsتحتوي على المفاعل. تحقق من أن الكريات في الجزء السفلي من الأنبوب (خفض عدد الأنابيب حسب الحاجة إذاضرورية)إذا لم تكن الأنابيب المقدمة متوافقة مع أدائك، قم بنقل حبة المفاعل إلى أنبوب بصري متوافق مع أدائك.

ب) افتح الأنبوبات وألق القبعات (غير مناسبة لآلات PCR في الوقت الفعلي) ، وأعد خليط التفاعل على الثلج كما هو موضح أدناه.

* يمكن استخدام الماء الخالي من النواة كمراقبة سلبية.

ج)تغطية الـ PCR باستخدام الغطاءات (الشرائط) المناسبة لـ PCR في الوقت الحقيقي(لم يتم توفيرها).

د) الدوران الأنابيب في سرعة منخفضة لمدة 10 ~ 15 ثانية، والطرد المركزي في 3000rpm لمدة 20 ثانية ووضعها في جهاز PCR في الوقت الحقيقي.

4)إعداد RT-PCR

حدد حجم التفاعل على 25μl ، وإجراء تكبير PCR كما هو موضح أدناه. فلوروسينسية عند 60 درجة مئوية، واختيار لا كمرجع سلبي.

5)النتيجةأتحليلوأناالتفسير