مجموعة اختبار سريع لسلامة الأغذية لـ Escherichia coli المنزف للداخل EHEC اكتشاف مع عامل PCR المجفف في الوقت الفعلي لا يلزم سلسلة البرد

1. الوصف

الإشريكية القولونية النزفية (EHEC) هي مجموعة من E. coli السلالات القادرة على التسبب في الإسهال النزفي والتهاب الأمعاء في البشر، مع السيروتيب O157:H7 هو السلالة الأكثر تمثيلاً. في حالات العدوى المنقولة عن طريق الغذاء، تشمل مصادر التلوث لحوم البقر والحليب الخام والدواجن ومنتجاتها، بالإضافة إلى الفواكه والخضروات، مع كون لحوم البقر هي وسيلة الانتقال الأساسية.

هذا المنتج عبارة عن كاشف تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي المجفف بالتجميد لـ الكشف عن الإشريكية القولونية سلبي.35 يستخدم المحفوظة للغاية rfbE جين الإشريكية القولونية سلبي. كهدف للكشف. إنه مزيج رئيسي يحتوي على جميع المكونات الضرورية، باستثناء الحمض النووي للقالب، وهو مسبق التوزيع كاختبار واحد في أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل للاستخدام السهل. لا يتطلب هذا المنتج سلسلة تبريد للنقل والتخزين، مما يقلل بشكل كبير من تكلفة الشحن، ويزيل الخسارة المحتملة عن طريق هدر الكاشف وتلوث الهباء الجوي.

2. المواصفات والتركيب

3. التخزين وفترة الصلاحية

تخزين في درجة حرارة الغرفة (5-3010 ثواني. إذا كانت الأنابيب المتوفرة غير متوافقة مع جهازك، فقم بنقل حبيبات الكاشف إلى أنبوب بصري متوافق مع جهازك.35 إنه مستقر لمدة تصل إلى 12 شهرًا35 بمجرد فتح العبوة المفرغة، يرجى تخزين المنتجات غير المستخدمة في الكيس البلاستيكي القابل لإعادة الإغلاق المزود بمجففات، و في كيس رقائق الألومنيوم. 

تنبيه: 

إن تصغير حبيبات الكاشف هو مؤشر على تسرب الرطوبة إلى الأنبوب وتضرر الكاشف. يجب التخلص من أي كواشف ذات حجم حبيبات أصغر بكثير من المعتاد أو اختبارها باستخدام التحكم الإيجابي قبل الاستخدام لاختبار العينة.   

4. المعدات والكواشف الإضافية المطلوبة

نوكلييك جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي

تحضير التحكم الإيجابيماصات ورؤوس3) 

تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي -ماء خالٍ4) 

إعداد RT-PCR5. أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي المتوافقة

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.35

مرق إثراء الطعام، القيء، عينات الإسهال، إلخ.

7. إجراء التشغيل

1) 

نوكلييك أnalysis هـxtractionاستخراج

الحمض النووي من العينات باستخدام مجموعة استخلاص مناسبة. يوصى بأن يتم الحمض النووي مع حوالي 100 ميكرولتر من محلول الإذابة (قم بقص عدد الأنابيب حسب الحاجةأو  H الخالي من النوكلياز2_O, ). إذا كانت الأنابيب المتوفرة غير متوافقة مع جهازك، فقم بنقل حبيبات الكاشف إلى أنبوب بصري متوافق مع جهازك.الاستخراج. يجب 2) 

تحضير التحكم الإيجابييمكن تخزين التحكم الإيجابي في درجة حرارة الغرفة قبل إعادة الترطيب

لمدة تصل إلى 12 شهرًا . يجب  إعادة ترطيبه قبل الاستخدام بإضافة 250 ميكرولتر من محلول TE أو nuclease-free H2_O, دوامة بسرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية، والطرد المركزي بسرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية. استخدمه على الفور أو قم بتخزينه عند -20°C10 ثواني35

تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي مix Preparationأ) افتح العبوة المفرغة وأخرج الشريط المكون من 8 أنابيب

s التي تحتوي على الكاشف. تحقق من وجود الحبيبات في قاع الأنبوب( قم بقص عدد الأنابيب حسب الحاجةإذا  ضروري). إذا كانت الأنابيب المتوفرة غير متوافقة مع جهازك، فقم بنقل حبيبات الكاشف إلى أنبوب بصري متوافق مع جهازك.ب) افتح الأنابيب وتخلص من الغطاء (الأغطية) (غير مناسب لأجهزة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي)، وقم بإعداد خليط التفاعل على الجليد كما هو موضح أدناه.

مكون

ج)

قم بتغطية تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام أغطية (شرائط) مناسبة لتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي(غير متوفرة).د) قم بتدوير الأنابيب بسرعة منخفضة لمدة 10 ~ 15 ثانية، والطرد المركزي عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 20 ثانية وضعها في جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي.

4) 

إعداد RT-PCRاضبط حجم التفاعل على 25 ميكرولتر، وإجراء تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل كما هو موضح أدناه. اجمع الفلورة FAM

عند 60 درجة مئوية، وحدد NONE كمرجع سلبي. الخطوة

النتيجة أnalysis و أناnterpretation