تلعب تكنولوجيا تضخيم الجينات، والتي غالباً ما تُوصف بأنها "المركبة الصورية" في المجال البيولوجي، دوراً محورياً في تشخيص الأمراض والبحث الجيني والمجالات العلمية الأخرى.من بين هذه التقنيات، يبدو PCR و qPCR متشابهين للوهلة الأولى ولكن يخدمون أغراض متميزة.وخاصةً أساليب تحليل البيانات لمساعدة الباحثين على اتخاذ قرارات مستنيرة.
رد فعل سلسلة البوليمراز (PCR) هو تقنية في المختبر لتضخيم شظايا الحمض النووي المحددة. باستخدام البوليمراز الحمض النووي،تستخدم PCR دورات تدفئة وتبريد متكررة لزيادة تسلسلات الحمض النووي المستهدف بشكل كبيريكمن جوهر هذه التكنولوجيا في تصميم البرايمر تسلسلات قصيرة تكمل نهايات الحمض النووي المستهدف والتي تدفع البوليمراز الحمض النووي إلى تكرار مناطق محددة.
تكرار هذه الدورات ينتج بسرعة ملايين نسخ من الحمض النووي. عادة ما يتم تحليل منتجات PCR من خلال تحليل الكهربائي الجل الجاروزي ، الذي يفصل الأجزاء حسب الحجم.
الـ PCR الكمي (qPCR) ، أو الـ PCR في الوقت الحقيقي، يمثل إصدارًا متقدمًا يراقب تضخيم الحمض النووي في الوقت الحقيقي، مما يتيح الكم الدقيق.هذه التكنولوجيا تستخدم علامات فلوروسنتية ترتبط مع تركيز الحمض النووي.
يعتمد الكمي على قيمة دورة الحد الأدنى (Ct) ، وهي رقم الدورة عندما يتجاوز الزهرة الخلفية. تشير قيم Ct المنخفضة إلى ارتفاع تركيزات الحمض النووي الأولية. تشمل طرق التحليل:
تحويل الرنا إلى الحمض النووي التكميلي (cDNA) للتضخيم اللاحق ، مما يتيح الكشف عن الحمض النووي النووي. هناك تنسيقان:
يخلق الجمع بين RT-PCR و qPCR RT-qPCR ، وهو المعيار الذهبي لكمية mRNA في دراسات التعبير الجيني.
| السمة | الـ PCR | qPCR |
|---|---|---|
| مراقبة في الوقت الحقيقي | لا (تحليل النقطة النهائية) | نعم.. |
| الكمية | النوعية / النصف الكمية | كمية |
| طريقة الكشف | تحليل الكهرباء بالجل | الفلورسنت |
| التطبيقات | استنساخ، تسلسل، تشخيص | تحليل التعبير، كمية مسببات الأمراض |
| تحليل البيانات | وجود النطاق/كثافة | قيم Ct ، منحنيات قياسية |
| الحساسية | أسفل | أعلى |
| الناتج | أسفل | أعلى |
| التكلفة | أسفل | أعلى |
يتضمن تحليل PCR تصورًا بسيطًا للجيل لشركات الحمض النووي ، مما يشير إلى الوجود / الغياب والكثرة النسبية من خلال كثافة الفرقة. ومع ذلك ، فإن هذا النهج يوفر دقة كمية محدودة.
تحليل qPCR يوفر تحدياً كمياً متطوراً من خلال قيم Ct، مما يتطلب:
بالنسبة للكمية النسبية، فإن اختيار الجينات المرجعية المناسب وتطبيعها أمر حاسم، في حين أن الكمية المطلقة تتطلب منحنيات قياسية عالية الجودة.
يعتمد الاختيار بين PCR و qPCR على أهداف البحث:
الكشف عن وجود/غياب الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن الكشف عن الكشف عن الكشف عن الكشف عن الكشف عن الك
تلعب تكنولوجيا تضخيم الجينات، والتي غالباً ما تُوصف بأنها "المركبة الصورية" في المجال البيولوجي، دوراً محورياً في تشخيص الأمراض والبحث الجيني والمجالات العلمية الأخرى.من بين هذه التقنيات، يبدو PCR و qPCR متشابهين للوهلة الأولى ولكن يخدمون أغراض متميزة.وخاصةً أساليب تحليل البيانات لمساعدة الباحثين على اتخاذ قرارات مستنيرة.
رد فعل سلسلة البوليمراز (PCR) هو تقنية في المختبر لتضخيم شظايا الحمض النووي المحددة. باستخدام البوليمراز الحمض النووي،تستخدم PCR دورات تدفئة وتبريد متكررة لزيادة تسلسلات الحمض النووي المستهدف بشكل كبيريكمن جوهر هذه التكنولوجيا في تصميم البرايمر تسلسلات قصيرة تكمل نهايات الحمض النووي المستهدف والتي تدفع البوليمراز الحمض النووي إلى تكرار مناطق محددة.
تكرار هذه الدورات ينتج بسرعة ملايين نسخ من الحمض النووي. عادة ما يتم تحليل منتجات PCR من خلال تحليل الكهربائي الجل الجاروزي ، الذي يفصل الأجزاء حسب الحجم.
الـ PCR الكمي (qPCR) ، أو الـ PCR في الوقت الحقيقي، يمثل إصدارًا متقدمًا يراقب تضخيم الحمض النووي في الوقت الحقيقي، مما يتيح الكم الدقيق.هذه التكنولوجيا تستخدم علامات فلوروسنتية ترتبط مع تركيز الحمض النووي.
يعتمد الكمي على قيمة دورة الحد الأدنى (Ct) ، وهي رقم الدورة عندما يتجاوز الزهرة الخلفية. تشير قيم Ct المنخفضة إلى ارتفاع تركيزات الحمض النووي الأولية. تشمل طرق التحليل:
تحويل الرنا إلى الحمض النووي التكميلي (cDNA) للتضخيم اللاحق ، مما يتيح الكشف عن الحمض النووي النووي. هناك تنسيقان:
يخلق الجمع بين RT-PCR و qPCR RT-qPCR ، وهو المعيار الذهبي لكمية mRNA في دراسات التعبير الجيني.
| السمة | الـ PCR | qPCR |
|---|---|---|
| مراقبة في الوقت الحقيقي | لا (تحليل النقطة النهائية) | نعم.. |
| الكمية | النوعية / النصف الكمية | كمية |
| طريقة الكشف | تحليل الكهرباء بالجل | الفلورسنت |
| التطبيقات | استنساخ، تسلسل، تشخيص | تحليل التعبير، كمية مسببات الأمراض |
| تحليل البيانات | وجود النطاق/كثافة | قيم Ct ، منحنيات قياسية |
| الحساسية | أسفل | أعلى |
| الناتج | أسفل | أعلى |
| التكلفة | أسفل | أعلى |
يتضمن تحليل PCR تصورًا بسيطًا للجيل لشركات الحمض النووي ، مما يشير إلى الوجود / الغياب والكثرة النسبية من خلال كثافة الفرقة. ومع ذلك ، فإن هذا النهج يوفر دقة كمية محدودة.
تحليل qPCR يوفر تحدياً كمياً متطوراً من خلال قيم Ct، مما يتطلب:
بالنسبة للكمية النسبية، فإن اختيار الجينات المرجعية المناسب وتطبيعها أمر حاسم، في حين أن الكمية المطلقة تتطلب منحنيات قياسية عالية الجودة.
يعتمد الاختيار بين PCR و qPCR على أهداف البحث:
الكشف عن وجود/غياب الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن غياب الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن وجود الكشف عن الكشف عن الكشف عن الكشف عن الكشف عن الكشف عن الك
