LyoDt® Reagent للكشف عن PCR في الوقت الفعلي لتجميد الكرونوباكتيريا - مسحوق جاف

LyoDt® Reagent للكشف عن PCR في الوقت الحقيقي لـ Cronobacter Powder المجفف بالتجميد

1.مقدمة

الكرونوباكتيرياهو جنس جديد من البكتيريا، والذي سلفه هو(إنتروباكتر ساكازاكي) الكرونوباكتيرياهو مسببات الأمراض الخطيرة المنقولة عن طريق الأغذية والتي تنتقل بشكل رئيسي من خلال حليب الأطفال الملوث، مما يسبب التهاب السحايا حديثي الولادة، والتهاب الدم السام، والتهاب الدم المتجمد. يمكن أن يصل معدل الوفيات إلى 80٪.

هذا المنتج هو مادة تجفيف مجففة في الوقت الحقيقي للكشف عنالكرونوباكتيريايستخدم جين ompA المحافظ بشدةالكرونوباكتيرياكمستهدف للكشف. إنه خليط رئيسي يحتوي على جميع المكونات اللازمة ، باستثناء الحمض النووي النموذجي ، ويتم توزيعه مسبقًا كاختبار واحد في أنابيب PCR لسهولة الاستخدام.هذا المنتج لا يتطلب سلسلة البرد للنقل والتخزين، مما يقلل بشكل كبير من تكاليف الشحن ، ويقضي على الخسائر المحتملة بسبب هدر المفاعل وتلوث الهباء الجوي.

2المواصفات والتكوين

3. التخزين ومدة صلاحية

تخزينها في درجة حرارة الغرفة (5-30 درجة مئوية) ، وهي مستقرة لمدة تصل إلى 12 شهراً. بعد فتح العبوة الفراغية، يرجى تخزين المنتجات غير المستخدمة في الحقيبة البلاستيكية القابلة لإعادة الختام المقدمة مع المجففات.وفي كيس من ورق الألومنيوم.

تحذير:

إن تقليص حبة المفاعل يشير إلى أن الرطوبة تتسرب إلى الأنابيب ويتم رطوبة المفاعل.يجب التخلص من أي مادة تجريبية ذات حجم حبة أصغر بكثير من المعتاد أو اختبارها بمراقبة إيجابية قبل الاستخداملاختبار العينات.

4المعدات الإضافية والمستجيبات المطلوبة

1) أداة PCR في الوقت الحقيقي

2) البيبيتات والرؤوس

3) مياه خالية من النواة

4) مجموعة استخراج الأحماض النووية

5أنظمة PCR متوافقة في الوقت الحقيقي

ABI 7500/Fast، Roche LightCycler 480II، BioRad CFX96، Bioer LineGene 9600

6عينات مقبولة

مرطبات تخصيب الغذاء، القيء، عينات الإسهال، الخ

7. إجراء العملية

1) استخراج الحمض النووكي

استخراج الحمض النووي من العينات باستخدام مجموعة استخراج مناسبة.يوصى بأنالحمض النووييتم إزالة مع حوالي 100μl من عازل الإزالة(الـ TEأوH خالية من النواة₂(أ) في الخطوة الأخيرة مناستخراج.يجب استخدام حمض النوكليين النقي على الفور أو تخزينه عند -20 درجة مئوية.

2) إعداد التحكم الإيجابي

يمكن تخزين العناية الإيجابية في درجة حرارة الغرفة قبل إعادة التجفيف لمدة تصل إلى 12 شهرًا. يجب إعادة ترطيبها قبل الاستخدام عن طريق إضافة 250 μl من عازل TE أو H خال من النوكليازات.₂O، تدور في سرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية، ويتم طردها عن المركز في سرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية.

3) إعداد مزيج PCR في الوقت الحقيقي

أ) افتح العبوة الفراغية واخرج شريطاً من 8 أنابيب يحتوي على المفاعل. تحقق من أن الكريات في الجزء السفلي من الأنابيب (اقطع عدد الأنابيب حسب الحاجة إذا لزم الأمر).إذا لم تكن الأنابيب المقدمة متوافقة مع جهازك، ونقل حبيبات المفاعل إلى أنبوب بصري متوافق مع أدائك.

ب) افتح الأنبوبات وألق القبعات (غير مناسبة لآلات PCR في الوقت الفعلي) ، وأعد خليط التفاعل على الثلج كما هو موضح أدناه.

خطوةاستخراج.يجب استخدام حمض النوكليين النقي على الفور أو تخزينه عند -20 درجة مئوية.

2) إعداد التحكم الإيجابي

يمكن تخزين العناية الإيجابية في درجة حرارة الغرفة قبل إعادة التجفيف لمدة تصل إلى 12 شهرًا. يجب إعادة ترطيبها قبل الاستخدام عن طريق إضافة 250 μl من عازل TE أو H خال من النوكليازات.₂O، تدور في سرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية، ويتم طردها عن المركز في سرعة منخفضة لمدة 15-20 ثانية.

3) إعداد مزيج PCR في الوقت الحقيقي

أ) افتح العبوة الفراغية واخرج شريطاً من 8 أنابيب يحتوي على المفاعل. تحقق من أن الكريات في الجزء السفلي من الأنابيب (اقطع عدد الأنابيب حسب الحاجة إذا لزم الأمر).إذا لم تكن الأنابيب المقدمة متوافقة مع جهازك، ونقل حبيبات المفاعل إلى أنبوب بصري متوافق مع أدائك.

ب) افتح الأنبوبات وألق القبعات (غير مناسبة لآلات PCR في الوقت الفعلي) ، وأعد خليط التفاعل على الثلج كما هو موضح أدناه.

* يمكن استخدام الماء الخالي من النواة كمراقبة سلبية.

• قم بتغطية PCR باستخدام الأغطية (الشرائط) المناسبة لـ PCR في الوقت الفعلي ((غير متوفر).

د) الدوران الأنابيب في سرعة منخفضة لمدة 10 ~ 15 ثانية ، والطرد المركزي في 3000rpm لمدة 20 ثانية ووضعها في جهاز PCR في الوقت الحقيقي.

2) إعداد RT-PCR

حدد حجم التفاعل إلى 25μl ، وإجراء تكبير PCR كما هو موضح أدناه. جمع فلوريسانس FAM عند 60 درجة مئوية ، واختيار NONE كمرجع سلبي.

3) تحليل النتائج وتفسيرها